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  • 基因编辑技术
Cas9基因编辑-基因定点敲入技术服务
Cas9-Cell line Knock-In service(Cas9-CKI)基因定点敲入细胞系是Cas9X技术团队针对实验室常用的各种细胞系,研究并确立针对不同的细胞的外源基因或者片段高效敲入(Knock-in, KI)的技术操作规程,Cas9基因编辑-基因定点敲入 技术服务 主要目的就是:解决KI效率低下和KI片段长度限制的问题。
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Cas9基因编辑- 基因定点敲入技术服务


  超过百个成功敲入KI案例,苏州tyc234cc太阳在线玩游戏生物携手海星生物一站式解决细胞基因功能研究纯合/杂合敲入细胞系。

  Cas9-Cell line Knock-In service(Cas9-CKI)基因定点敲入细胞系是Cas9X技术团队针对实验室常用的各种细胞系,研究并确立针对不同的细胞的外源基因或者片段高效敲入(Knock-in, KI)的技术操作规程,主要目的就是:解决KI效率低下和KI片段长度限制的问题。

   目前使用Cas9的进行基因KI研究方法,主要应用在目的基因后面加上标签,对目的蛋白进行定位;再有就是通过对小鼠细胞的目的基因进行修饰替换成为人的基因,用于动物的CDX模型等。KI实现的方案包括:使用合成的Oligo或者ssDNA(single-stranded DNA,ssDNA)作为“Donor”来实现长片段的敲入;也可以通过AAV病毒的方式(其病毒以ssDNA的方式存在于细胞核中)导入ssDNA作为“Donor”载体,也可以通过dsDNA片段或者环状质粒作为“Donor”来实现KI的目的。

     但是不同的细胞模型KI的效率依然不能令人满意,且不同的细胞系之间的效率差异很大,很多细胞无法实现定点的KI。 Cas9X针对不同的片段的长度和不同的细胞特性使用不同的KI策略:小的片段使用Oligo进行KI,再长一点的使用ssDNA进行KI,如果长度超过1Kb的将使用重组的办法进行KI。针对细胞系的KI效率非常低的,需要先构建Cas9稳转细胞株再进行gRNA和Donor的转染来提高KI效率。Cas9X努力优化实验条件满足不同细胞系和不同片段长度的KI服务需求。

Cas9基因编辑- 基因 定点敲入 技术服务 为你的细胞探索优化的KI实验方案。


  我们还能为您提供:

  • 基因敲除细胞系服务
  • 基因点突变细胞系服务
  • 基因定点敲入细胞系服务
  • 微生物基因编辑服务
  • 基因敲除Cell Pool服务

 案例分析 

  基因敲入项目名称

  构建eGFP基因敲入的人胶质瘤细胞细胞
实验设计

种属:Human; 基因名称:PRNP
gRNA位点:ATCTTCCTGATAGTGGGATGAGG
Donor载体:5'arm-eGFP-3'arm

基因敲入技术原理图

细胞信息

种属:Human; 细胞名称:人胶质瘤细胞U251
培养基:DMEM,10%FBS
 
细胞检测

无菌检测:合格; 支原体检测:合格
细胞克隆形成率检测:细胞增殖能力较好,克隆形成率较好。
细胞基因型检测:针对gRNA打靶位置及其附近基因组序列进行测序。测序结果与理论序列一致。
 

细胞转导                                                           

电转参数:1005V,35ms,2次; 电转体系:10 uL
 
PCR 筛选

筛选克隆数量:160; 阳性数量:10

电泳示意图



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